تنوع ملسوكوس بلوتونيوس من نحل العسل اليرقات في اليابان والتجريبية استنساخ الأوروبي فولبرود مع العزلات غير نمطية مثقفDiversity of Melissococcus plutonius from Honeybee Larvae in Japan and Experimental Reproduction of European Foulbrood with Cultured Atypical Isolates

تنوع ملسوكوس بلوتونيوس من نحل العسل اليرقات في اليابان والتجريبية استنساخ الأوروبي فولبرود مع العزلات غير نمطية

مثقف

لأوروبي فولبرود (إف) هو مرض معد مهم من يرقات نحل العسل، ولكن آلياتها المسببة للأمراض لا تزال
غير مفهومة. العامل المسبب، ميليسوكوكوس بلوتونيوس، هو كائن حي سريع، و ميكرويروفيليك إلى اللاهوائية
والظروف، وإضافة فوسفات البوتاسيوم إلى وسائل الإعلام والثقافة اللازمة للنمو. على الرغم من M. بلوتونيوس هو
ويعتقد أن يكون مثيرا بشكل ملحوظ، بالإضافة إلى M. بلوتونيوس العزلات ذات الخصائص الثقافية النموذجية، M. بلوتونيوسليك
والكائنات الحية، مع خصائص تبدو مختلفة عن تلك التي نموذجية M. بلوتونيوس، وغالبا ما تم عزل من
اليرقات المريضة مع علامات سريرية من إف في اليابان. التوصيف الثقافي والبيوكيميائي ل 14 م M. بلوتونيوس و 19 م.
أظهرت السلالات / العزلات مثل البلوتونيوس أنه على عكس سلالات M. بلوتونيوس نموذجية / العزلات، كانت العزلات M. بلوتونيوس مثل لا
ولم يكن مطلوبا إضافة فوسفات البوتاسيوم للنمو الطبيعي. وعلاوة على ذلك، فقط M. بلوتونيوس مثل
العزلات، ولكن ليس نموذجية M. بلوتونيوس سلالة / العزلات، نمت لاهوائيا على الصوديوم الفوسفات تستكمل المتوسطة و
الهوائية على بعض وسائل الإعلام التي تستكمل الملح البوتاسيوم، كانت إيجابية لنشاط b- جلوكوزيداز، تحلل إسكولين، و
إنتاج حمض من L-أرابينوس، D-سيلوبيوس، و ساليسين. على الرغم من الاختلافات المظهرية، 16S الرنا الريباسي تسلسل الجينات
والتحليل والتهجين الحمض النووي الحمض النووي أثبتت أن M. بلوتونيوس مثل الكائنات كانت متطابقة تصنيفيا ل M.
plutonius. ومع ذلك، من خلال تحليل نابض هلام الحقل نابض، كانت هذه المعتادة وغير نمطية (M. بلوتونيوس مثل) العزلات
مجمعة بشكل منفصل في مجموعتين متميزتين وراثيا. على الرغم من أن M. بلوتونيوس من المعروف أن تفقد فوعة بسرعة عندما
مثقف بشكل مصطنع، أظهرت العدوى التجريبية من العزلات التمثيلية أن غير نمطي M. بلوتونيوس الحفاظ على القدرة
أن يسبب إف في يرقات نحل العسل حتى بعد مثقف في المختبر في وسائل الإعلام المختبرية. لأن الانخفاض السريع في الفوعة في
كان مثقف M. بلوتونيوس عقبة رئيسية لتوضيح التسبب في إف، شاذة بلوتونيوس اكتشفت في
وسوف تكون هذه الدراسة انفراجة في البحوث إف.

Diversity of Melissococcus plutonius from Honeybee
Larvae in Japan and Experimental Reproduction of
European Foulbrood with Cultured Atypical Isolates
Rie Arai1,2, Kiyoshi Tominaga3, Meihua Wu4, Masatoshi Okura5, Kazutomo Ito6, Naomi Okamura7,
Hidetaka Onishi8, Makoto Osaki5¤, Yuya Sugimura9, Mikio Yoshiyama9, Daisuke Takamatsu2,5*

Diversity of Melissococcus plutonius from Honeybee Larvae in Japan and Experimental Reproduction of European Foulbrood with Cultured Atypical Isolates
Abstract
European foulbrood (EFB) is an important infectious disease of honeybee larvae, but its pathogenic mechanisms are still
poorly understood. The causative agent, Melissococcus plutonius, is a fastidious organism, and microaerophilic to anaerobic
conditions and the addition of potassium phosphate to culture media are required for growth. Although M. plutonius is
believed to be remarkably homologous, in addition to M. plutonius isolates with typical cultural characteristics, M. plutoniuslike
organisms, with characteristics seemingly different from those of typical M. plutonius, have often been isolated from
diseased larvae with clinical signs of EFB in Japan. Cultural and biochemical characterization of 14 M. plutonius and 19 M.
plutonius-like strain/isolates revealed that, unlike typical M. plutonius strain/isolates, M. plutonius-like isolates were not
fastidious, and the addition of potassium phosphate was not required for normal growth. Moreover, only M. plutonius-like
isolates, but not typical M. plutonius strain/isolates, grew anaerobically on sodium phosphate-supplemented medium and
aerobically on some potassium salt-supplemented media, were positive for b-glucosidase activity, hydrolyzed esculin, and
produced acid from L-arabinose, D-cellobiose, and salicin. Despite the phenotypic differences, 16S rRNA gene sequence
analysis and DNA-DNA hybridization demonstrated that M. plutonius-like organisms were taxonomically identical to M.
plutonius. However, by pulsed-field gel electrophoresis analysis, these typical and atypical (M. plutonius-like) isolates were
separately grouped into two genetically distinct clusters. Although M. plutonius is known to lose virulence quickly when
cultured artificially, experimental infection of representative isolates showed that atypical M. plutonius maintained the ability
to cause EFB in honeybee larvae even after cultured in vitro in laboratory media. Because the rapid decrease of virulence in
cultured M. plutonius was a major impediment to elucidation of the pathogenesis of EFB, atypical M. plutonius discovered in
this study will be a breakthrough in EFB research.
Citation: Arai R, Tominaga K, Wu M, Okura M, Ito K, et al. (2012) Diversity